Hallo,

kann mir vielleicht jemand bei volgenden fragen helfen? habe übermorgen prüfung.

1)EcoRi schneiden und mit Klenow auffüllen.
soweit ist mir klar:
Mir Ecori geschnitten, 5' Überhänge
5'-G AATTC-3'
3'-CTTAA G-5'

Klenow füllt die 5'Überhänge. aber wie soll das aussehen??

2) wiviel pg kann man mit etbt bzw southern blot detektieren?

3) wie löst man sonden vom target und wie nennt man dieses verfahren? (ergibt für mich keinen sinn)

4) Welche fragmente werden detektiert bei Homozygot A, Homozygot B, Homozygot AB

5)Schreiben sie die Sequenz an, die entsteht, wenn man mit Sall (5'G/TCGAC-3') schneidet, mit Klenow auffüllt und wieder religiert.´Wird zumindest eine der schnittstellen wieder religiert, wenn ja welche?

Die Sequenz könnt denk ich so aussehen:

5'-G TCGAC-3'
3'-CAGCT G-3'
aber der rest?


bin für eine hilfe echt dankbar!!!

1. Antwort in den E.coli Unterlagen, sogar mit Bild
2. mit EtBr 10-20ng, souther blot 0,1pg
3. Wie löst man Sonden vom Target und wie nennt man dieses Verfahren?
• Dieses Verfahren nennt man Stripping.
• Nach dem Stripping können Nylon-Membranen wieder verwendet werden.
• Bei einem Luminiscenten-Signal muss der Filter einfach mit Wasser geswachen werden.
• Wurde colorimetrically detektiert, so muss der die Nylon- Membran in DMF inkubiert werden.

@Hannes, die Fragen da sind aber nicht für den Genotypteil oder?
Wieso sollte ich mir für den Genotypteil den E.Coli Teil ansehen, bzw. sind das ja spezifisch Fragen für den anderen Teil oder?

Beim Genotyp-Kolloquium werden auch weiterführende Fragen/Verständnisfragen gestellt. Dadurch ergibt sich auch die ein oder andere "sonderbare" bzw. scheinbar banale Prüfungsfrage, die mit der eigentlichen Durchführung im Übungslabor nicht unbedingt viel zu tun hat.
Ich würde meinen, dass das nicht wirklich verwunderlich ist, weil sich E.coli und Genotyp zu einem gewissen Teil im Stoffgebiet überschneiden, und Verdünnungsberechnungen etc. so gut wie immer ein Thema sind.

(By the way, stripping und reprobing kommen das ein oder andere Mal in den Unterlagen zum Genotyp-Teil vor, sind also definitiv dafür relevant.)

Kann mir bitte jemand helfen bei der Frage:
Sie setzen bei einer PCR 5 pmol von jeweils beiden Primer ein. Wie viele DNA Moleküle können theoretisch generiert werden?

Wie komm ich da auf die Antwort??

Ganz einfach : Du nimmst die Avogadro Zahl ( 6,022*10^23entspricht 1 mol)
Der Rest ist Grundschulmathematik und wird mit einer einfachen Schlussrechnung gelöst..

Ahhh auf das bin ich natürlich ned kommen vielen Dank!

und ich rechne es dann einfach mal 2 oder weil ich ja die 5pmol jeweils von beiden Primer habe?

Genau

Hätte da auch noch weitere Fragen:

1) Wenn man PCR und anschließende Gelelektrophorese einer DNA durchführt, und außer der gewünschten Bande noch eine zweite erhält, was kann das sein?

2) Was kann bei einer PCR schief laufen wenn alle Reagenzien korrekt pipettiert wurden?

3) Was beeinflusst den Tm Wert der Primer?
kann das die Primer konzentration, salzkonzentration und Mg++ Konzentration sein?

4) Wovon ist der Tm Wert bei der PCR abhängig?
abhängig von Art der DNA, vom GC Gehalt, von der Länge???
ist das richtig?

Vielen Dank!

nein, du brauchst ja 2 primer um 1 dsDNA Strang zu synthetisieren

muss ich das ergebnis jetzt mal 2 rechnen oder nicht? Wäre toll wenn jemand das Beispiel kurz hier durchrechnen könnt. Bin gerade etwas verwirrt. Danke!

Anfangs hat man 5 pmol pro Primer. Von beiden DNA-Einzelstängen werden 5 pmol erzeugt -> man hat 10 pmol einzelsträngige DNA. Was man nicht vergessen darf: Das Endprodukt einer PCR ist doppelstängige DNA, also liegen nicht 10 pmol sondern 5pmol Endprodukt vor. Bei diesem Beispiel geht es mehr ums Verständnis als um die Rechenkunst

Ich hab nach dem Kolloquium mit dem Prof. gesprochen und er hat mir bestätigt, dass 5 pmol stimmt.